[1]顾富城,杨美鑫,林惠红,等.基于Toll样受体/髓系分化初级反应蛋白质88信号通路探讨四妙汤加土茯苓方治疗急性痛风性关节炎的作用机制[J].中医正骨,2024,36(08):9-18.
　GU Fucheng,YANG Meixin,LIN Huihong,et al.The mechanism of Simiaotang and Tufuling Fang(四妙汤加土茯苓方)for treatment of acute gouty arthritis:a Toll-like receptor/myeloid differentiation primary response protein 88 signaling pathway-based experimental study[J].The Journal of Traditional Chinese Orthopedics and Traumatology,2024,36(08):9-18.
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基于Toll样受体/髓系分化初级反应蛋白质88信号通路探讨四妙汤加土茯苓方治疗急性痛风性关节炎的作用机制()
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《中医正骨》[ISSN:1001-6015/CN:41-1162/R]

卷:
第36卷
期数:
2024年08期
页码:
9-18
栏目:
基础研究
出版日期:
2024-08-20

文章信息/Info

Title:
The mechanism of Simiaotang and Tufuling Fang(四妙汤加土茯苓方)for treatment of acute gouty arthritis:a Toll-like receptor/myeloid differentiation primary response protein 88 signaling pathway-based experimental study
作者:
顾富城1; 杨美鑫1; 林惠红2; 吴伟欣1; 耿秋东3; 王和鸣4; 李楠1
1.福建中医药大学中医学院,福建 福州 350122; 2.福建省漳州市中医院,福建 漳州 363000; 3.中医骨伤及运动康复教育部重点实验室,福建 福州 350122; 4.福建中医药大学附属人民医院,福建 福州 350122
Author(s):
GU Fucheng1; YANG Meixin1; LIN Huihong2; WU Weixin1; GENG Qiudong3; WANG Heming4; LI Nan1
1.School of Traditional Chinese Medicine,Fujian University of Traditional Chinese Medicine,Fuzhou 350122,Fujian,China 2.Zhangzhou Traditional Chinese Medical Hospital,Zhangzhou 363000,Fujian,China 3.Key Laboratory of Orthopedics&Traumatology and Rehabilitation of Traditional Chinese Medicine of Ministry of Education,Fuzhou 350122,Fujian,China 4.People's Hospital Affiliated to Fujian University of Traditional Chinese Medicine,Fuzhou 350122,Fujian,China
关键词:
关节炎; 痛风性;  四妙汤;  土茯苓;  类Toll受体;  髓系分化因子88
摘要:
目的:基于Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)/髓系分化初级反应蛋白质88(myeloid differentiation primary response protein 88,MyD88)信号通路探讨四妙汤加土茯苓方治疗急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)的作用机制。方法:将48只SPF级雄性SD大鼠随机分为6组,每组8只。模型组、秋水仙碱组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组大鼠以高尿酸造模法结合尿酸盐注射法在右侧踝关节进行AGA造模,空白组以生理盐水灌胃,并在右侧踝关节注射生理盐水。AGA造模结束后,观察大鼠右侧踝关节,评估炎症指数,并计算踝关节肿胀指数。AGA造模结束后24 h,中药低、中、高剂量组大鼠均以四妙散加土茯苓方药液灌胃(生药用量分别为5 g·kg-1、10 g·kg-1、20 g·kg-1),秋水仙碱组以秋水仙碱混悬液灌胃,空白组和模型组大鼠均以等量生理盐水灌胃,每天1次,连续灌胃7 d。药物干预结束后24 h,腹主动脉取血,测定血清尿素氮和肌酐含量; 取右侧踝关节滑膜组织,以实时荧光定量聚合酶链反应技术检测TLR/MyD88信号通路相关基因TLR2、TLR4、MyD88、核因子κB抑制剂激酶α(nuclear factor-κB inhibitor kinase-α,IKK-α)、核因子κB抑制剂α(nuclear factor-κB inhibitor-α,IκB-α)mRNA表达水平,以蛋白质印迹技术检测IKK-α、IκB-α蛋白表达水平,采用免疫组化技术观察TLR2、TLR4蛋白表达情况及巨噬细胞聚集情况。结果:①模型验证结果。除空白组外,其余5组大鼠右侧踝关节注射尿酸盐混悬液后均逐渐发生肿胀,24 h后炎症指数均达到2级以上。造模后4 h、8 h、12 h、24 h,模型组、秋水仙碱组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组的踝关节肿胀指数均高于空白组(造模后4 h:P=0.000,P=0.000,P=0.002,P=0.004,P=0.031; 造模后8 h:P=0.001,P=0.000,P=0.002,P=0.007,P=0.002; 造模后12 h:P=0.000,P=0.000,P=0.004,P=0.010,P=0.006; 造模后24 h:P=0.004,P=0.000,P=0.003,P=0.001,P=0.006)。②血清尿素氮和肌酐含量检测结果。6组大鼠血清尿素氮、肌酐含量总体比较,组间差异均无统计学意义。③踝关节滑膜组织中TLR/MyD88信号通路相关基因mRNA水平检测结果。6组大鼠踝关节滑膜组织中MyD88 mRNA水平比较,差异无统计学意义。模型组的TLR2、TLR4、IKK-α、IκB-α mRNA水平均高于空白组(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.020)。秋水仙碱组和中药中剂量组的TLR2、TLR4、IKK-α、IκB-α mRNA水平均低于模型组(TLR2:P=0.000,P=0.005; TLR4:P=0.018,P=0.000; IKK-α:P=0.003,P=0.004; IκB-α:P=0.008,P=0.010); 中药低剂量组的TLR2、IκB-α mRNA水平均低于模型组(P=0.000,P=0.020),2组TLR4、IKK-α mRNA水平的组间差异均无统计学意义(P=0.564,P=0.884); 中药高剂量组的TLR4 mRNA水平低于模型组(P=0.024),2组TLR2、IKK-α、IκB-α mRNA水平的组间差异均无统计学意义(P=0.349,P=0.320,P=0.579)。中药低、中剂量组与秋水仙碱组的TLR2、TLR4、IKK-α、IκB-α mRNA水平比较,组间差异均无统计学意义(TLR2:P=0.836,P=0.056; TLR4:P=0.669,P=0.069; IKK-α:P=0.387,P=0.989; IκB-α:P=0.721,P=0.518); 中药高剂量组的TLR2、TLR4 mRNA水平均高于秋水仙碱组(P=0.000,P=0.002),2组IKK-α、IκB-α mRNA水平的组间差异均无统计学意义(P=0.313,P=0.136)。中药低、高剂量组的TLR2、TLR4、IKK-α、IκB-α mRNA水平均高于中药中剂量组(TLR2:P=0.000,P=0.047; TLR4:P=0.000,P=0.001; IKK-α:P=0.006,P=0.042; IκB-α:P=0.021,P=0.037); 中药低剂量组的TLR2、TLR4 mRNA水平均低于中药高剂量组(P=0.001,P=0.006),2组IKK-α、IκB-α mRNA水平的组间差异均无统计学意义(P=0.394,P=0.068)。④踝关节滑膜组织中IKK-α、IκB-α蛋白水平检测结果。模型组大鼠踝关节滑膜组织中IKK-α、IκB-α蛋白水平均高于空白组(P=0.000,P=0.000); 秋水仙碱组IKK-α、IκB-α蛋白水平均低于模型组(P=0.000,P=0.000); 秋水仙碱组IKK-α蛋白水平高于中药低剂量组(P=0.000),2组IκB-α蛋白水平的差异无统计学意义(P=0.050); 秋水仙碱组IKK-α、IκB-α蛋白水平均高于中药中、高剂量组(IKK-α:P=0.000,P=0.000; IκB-α:P=0.000,P=0.000); 中药低剂量组IKK-α、IκB-α蛋白水平均高于中药中、高剂量组(IKK-α:P=0.000,P=0.005; IκB-α:P=0.000,P=0.006); 中药中剂量组IKK-α蛋白水平低于中药高剂量组(P=0.005),2组IκB-α蛋白水平的差异无统计学意义(P=0.108)。⑤踝关节滑膜组织中巨噬细胞聚集情况观察结果。与空白组相比,其余5组大鼠踝关节滑膜组织中巨噬细胞均明显聚集,其中模型组巨噬细胞数量最多; 4个药物干预组巨噬细胞数量均较模型组减少,其中中药中剂量组和秋水碱组巨噬细胞数量减少更明显。⑥踝关节滑膜组织中TLR2、TLR4蛋白表达情况观察结果。与空白组相比,其余5组大鼠踝关节滑膜组织中TLR2、TLR4蛋白均明显表达,其中模型组表达最明显; 4个药物干预组TLR2、TLR4蛋白表达水平均较模型组降低,其中中药中剂量组和秋水仙碱组降低更明显。结论:四妙汤加土茯苓方治疗AGA的机制可能与其减少巨噬细胞聚集,下调TLR/MyD88信号通路相关基因表达,减少炎症因子释放有关,其中中剂量作用效果最佳,作用效果与秋水仙碱相当。

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备注/Memo

备注/Memo:
基金项目:福建省卫生健康科技计划项目(2021QNA068)
通讯作者:李楠 E-mail:mr.linan@126.com
更新日期/Last Update: 1900-01-01